故事发生在抗日战争时期。因军统谍网连遭日特破坏，戴笠(王岗 饰)从集中营选出因故做牢的陈一鸣(庹宗华 饰)少校，令他组建“眼镜蛇”特工小组，暗杀日特驻华头子中村一郎(于震 饰)，领命后陈一鸣即刻招募各路高人进行培训。这时，美军上校梅乐斯找到戴笠，要他设法营救被中村逮捕的美特工史密斯夫妇。中共高级特工黄天明(侯勇 饰)得到南京黄云睛送来的情报，他奉上级指示，将史密斯夫妇所在位置故意泄露给军统南京站高站长(刘猛 饰)，陈一鸣带着特工小组出发了。他们化装混入医院，先救出了史密斯夫妇，然后执行此次来的首要任务：刺杀中村一郎，他们能顺利完成任务吗……
